Detection of ‘Candidatus Liberibacter Asiaticus’ in Cacopsylla (Psylla) citrisuga (Hemiptera: Psyllidae)

Abstract

Nymphs of the pomelo psyllid, Cacopsylla (Psylla) citrisuga Yang & Li, were collected from huanglongbing (HLB) symptomatic lemon trees, Citrus limon (L.) in Yunnan Province, China. DNA samples extracted from groups of 2-10 pomelo psyllid nymphs of all stages and from leaves of lemon plants were analyzed with nested-PCR in order to detect ‘Candidatus Liberibacter asiaticus’ (Las). The results showed that 24 out of the 49 lemon trees were Las-positive. Also psyllid nymphs collected from 10 out of the 24 Las-positive plants were Las-positive. DNA extracted from individual late stage nymphs (3rd to 5th instars) collected from Las-infected trees were then subjected to nested-PCR trials. Twelve out of the 29 nymphs proved to be Las positive. All nymphs collected from Las-negative lemon trees were also Las-negative. Most psyllid samples which showed positive in nested-PCR were also positive in conventional-PCR detection. The amplified fragment of the 16S rRNA gene of ‘Ca. Liberibacter spp.’ from positive psyllid samples was 99% similar to those of Las strain psy62 in GenBank. These results demonstrate that Cacopsylla (Psylla) citrisuga is another Las carrier insect. Transmission studies are underway to determine whether Las-positive psyllids can transmit Las to healthy citrus.

Ninfas del psílido del pomelo, Cacopsylla (Psylla) citrisuga Yang & Li, fueron colectadas de árboles de limón, Citrus limon (L.), con síntomas de huanglongbing (HLB) en la provincia de Yunnan, China. Muestras de ADN extraídas de grupos de 2-10 ninfas de todos los estadios del psílido, y de hojas de limonero, fueron analizadas mediante PCR- anidada para detectar a ‘Candidatus Liberibacter asiaticus’ (Las). Los resultados mostraron que 24 de los 59 árboles fueron Las-positivo. Ninfas provenientes de 10 de los 24 árboles Las-positivos, también fueron Las-positivas. ADN extraído individualmente de ninfas de últimos estadios (3er a 5to instar) colectadas de arboles infectados con Las fueron sujetas a ensayos de PCR anidada. Doce de las veintinueve ninfas demostraron ser Las-positivas. Todas las ninfas colectadas de árboles de limón Las-negativos también fueron Las-negativas. La mayoría de muestras de psílidos que resultaron Las-positivas mediante el PCR anidado también fueron positivas en la detección mediante PCR convencional. El fragmento amplificado del gen 16S rRNA de ‘Ca. Liberibacter spp.’ de muestras de psílidos Las-positivos mostró un 99% de similitud con la cepa Las psy62 del GenBank. Estos resultados demuestran que Cacopsylla (Psylla) citrisuga es otro insecto portador de Las. Estudios están en curso para determinar si psílidos que son Las-positivos pueden transmitir Las a plantas de cítricos saludables.

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